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液相色譜儀HPLC C18色譜柱的日常保養(yǎng)與維修
更新時(shí)間:2017-05-05   點(diǎn)擊次數(shù):2513次

1. C18色譜柱的日常使用與保養(yǎng)

  在日常分離分析工作中,色譜柱使用是否得當(dāng),直接影響色譜柱的壽命。下面介紹C18柱在日常使用過(guò)程中應(yīng)注意的事項(xiàng)。
  (1)柱子在裝卸、更換時(shí),動(dòng)作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng),以免柱床產(chǎn)生空隙。(2)如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析,樣品種類有限,但分析次數(shù)多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置1根柱,這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。(3)如使用柱溫控制裝置時(shí),應(yīng)注意在通入流動(dòng)相后才能升溫。(4)流動(dòng)相使用前需進(jìn)行脫氣處理,以免降低柱效和影響檢測(cè)等。樣品溶液需經(jīng)適當(dāng)?shù)那疤幚砑斑^(guò)濾,以減少柱污染和堵塞。(5)在更換流動(dòng)相種類時(shí),應(yīng)注意溶劑的互溶性,防止發(fā)生鹽析現(xiàn)象。(6)柱子的實(shí)際操作壓力應(yīng)低于填裝時(shí)的zui高壓力,在zui高壓力一半以下。一般不超過(guò)20 593.965~29 419.95 kPa。在低壓力(
14 709.975 kPa)的范圍使用,可使柱保持長(zhǎng)時(shí)期的高柱效。(7)C18色譜柱屬非極性鍵合相色譜柱,流動(dòng)相的pH值應(yīng)嚴(yán)格控制在2~7之間,以免損壞柱子。(8)在完成分離分析工作之后,不應(yīng)立即停機(jī),需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,一般0.5 h以上,以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。(9)如果流動(dòng)相中有鹽類,先用水充分清洗。如果是胺類(如*胺類或四丁基胺類)添加到流動(dòng)相中,要用50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶劑沖洗,不要只用水沖洗。(10)C18一般用100%甲醇作為保存溶劑,以防柱子干裂而損壞。嚴(yán)禁水或緩沖溶液長(zhǎng)時(shí)間在色譜流路中保留。(11)選用合適的C18保護(hù)柱,以保護(hù)分析柱免受雜質(zhì)顆粒及不可逆吸附的干擾物的影響。保護(hù)柱內(nèi)裝填料顆粒度應(yīng)與分析柱填料的顆粒度盡量一致。(12)柱的保存期不宜太長(zhǎng)。短期不用的C18柱,用甲醇沖洗30~60 min,然后將柱兩端密封。較長(zhǎng)期不用的柱子,一是采取定期沖洗,再密封的方法;二是在沖洗后,柱兩端各裝1只有一定容量的灌滿甲醇的容器(只裝一端也可),以補(bǔ)充在較長(zhǎng)存放期間柱內(nèi)溶劑的蒸發(fā)。

2. C18色譜柱的維修

  色譜柱在日常使用過(guò)程中,盡管保護(hù)嚴(yán)格,樣品和流動(dòng)相盡管經(jīng)過(guò)前處理,但經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的使用,仍然難以*避免柱子受到污染,固定相流失、板結(jié)、柱床塌陷以及柱效下降等。有些可以通過(guò)維修,使部分柱效恢復(fù)。

2.1 柱污染再生技術(shù) 色譜柱污染后,可以用合適的溶劑沖洗,使柱效再生。C18柱常規(guī)的再生洗滌方法是:分別用甲醇、三氯甲wan、甲醇/水各60 mL依次通過(guò)色譜柱,再用100%甲醇60 mL平衡色譜柱后封存,柱效將恢復(fù)正常。必要時(shí),根據(jù)柱污染性質(zhì)(如有機(jī)污染、鹽類污染等),采用0.05 mol/L H2SO4、0.5 mol/L H3PO4或0.1 mol/L EDTA鈉鹽沖洗,然后再用水沖洗,zui后用100%甲醇平衡色譜柱后封存。對(duì)于嚴(yán)重污染的C18柱,可采用水、甲醇、氯f(wàn)ang、乙烷依次沖洗后,按順序倒過(guò)來(lái)再?zèng)_洗1次,每次所用溶劑60 mL,不接檢測(cè)器,zui后用100%甲醇平衡色譜柱封存。

2.2 柱污染的修復(fù) 在柱污染再生無(wú)效或已知柱污染嚴(yán)重時(shí),可以采用柱修補(bǔ)的方法解決,但柱污染深度不宜超過(guò)5 mm。方法是將特制小鏟將污染部分挖去,再用與柱填料相同的固定相與流動(dòng)相混合制成漿狀,然后將漿狀固定相仔細(xì)補(bǔ)入被挖去的部分(盡量使后填補(bǔ)的固定相接近原裝的緊密程度),修平端面即可。修好的柱子如果柱頭兩端的篩板的孔徑是一致的,可將柱子顛倒過(guò)來(lái)使用一般時(shí)間,目的是借助流動(dòng)相沖洗作用,恢復(fù)柱床緊密程度。

2.3 柱塌陷的修復(fù) 柱塌陷的原因很多。對(duì)于塌陷不太嚴(yán)重時(shí),如果柱頭兩端的篩板孔徑是一致的,可將柱顛倒使用一般時(shí)間,即可恢復(fù)性能。當(dāng)塌陷嚴(yán)重(5 mm左右)時(shí),可采用柱污染的修復(fù)方法修補(bǔ)即可。

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